[수의생리학실습] Xenopus laevis oocytes preparation for elecrophysiology

목차

1. 실험제목
2. 실험목적
3. 실험재료 및 과정
4. Check points
5. 참고문헌

본문내용

3. 실험재료 및 과정
■ 실험재료
Pincette, Scissor, Collagenase, Needle, Needle holder, Cat-gut 봉합사, OR2 solution, ND96 solution, Shaker, Petri dish, Oocyte holder
■ 실험과정
1. Oocytes isolation
1) Xenopus laevis 개구리를 0.1% 3-amino benzoic acid ehtyl ester solution 또는 ice에 묻어 마취시킴
2) 충분히 마취되어서 움직이지 않으면 의 복부의 피부를 5~7mm 정도 절개한 후 복근막과 복근을 절 개하여 oocytes를 채취한다
3) 개구리의 복근과 근막을 Cat-gut 봉합사로 함께 봉하?W고 그 후 피부를 봉합한다.
4) 채취한 oocytes를 50ml conical tube에 Type 2 Collagenase 1.5mg/ml(OR2 solution)에 넣고 약 90 분 정도 실온에서 shaking 해준다
5) Oocytes가 충분히 분리 되었다고 생각되면 ND96 solution으로 4번 이상 washing 해 준다
6) Washing한 oocytes를 100 dish에서 5~6 stage 크기의 건강한 oocytes를 분리해서 따로 모은다
7) 각 stage에 따른 oocyte의 크기와 모양
[Oocytes follicle과 collagenase 처리 후 분리된 모습]

2. Preparation of DNA and RNA
1) Cloning
세포 실험을 하기 위해서는 동일한 세포의 집합이 필요하듯이, 유전자 연구를 하기 위해서는 동일한 유전자를 다량 가지고 있어야 한다. 이렇게 동일한 유전자의 집합을 만드는 과정이 바로 gene cloning이다. 예를 들어 연구하고자 하는 특정 channel에 대한 유전정보를 갖는 동일한 유전자들을 만드는 과정이다. 이 과정에서의 핵심 구성요소는 vector이다. Cloning vetor로 작용하기 위해서는, DNA분자(벡터)는 숙주세포로 들어갈 수 있어야 하고, 일단 들어가면, 수많은 복사본을 생산하기 위해 복제할 수 있어야만 한다.

참고 자료

수의 생리학 실습 handout
분자세포생물학 4판 Cooper
분자생물학 2판 Robert F. Weaver
유전학원론 4판 Simmons
두산 동아 대백과 사전