세포파쇄법 실험 보고서-효소 활성 측정법

목차

1. 제목
2. 실험의 목적
3. 실험의 원리
4. 실험 재료
5. 실험 방법
6. 실험 결과
7. 고찰

본문내용

1. 제목 : 효소 활성 테스트 - 세포 파쇄법

2. 실험의 목적
이번 시간에는 세포 파쇄법(Cell disruption method)와 효소 활성 측정법(Enzyme activity test)을 알아보도록 한다.

3. 실험의 원리
1) 세포 파쇄의 목적
◎ 우리가 원하는 product를 얻기 위해서
◎ Biological products
-Extracellular(예:아미노산, 항생제, 효소 등)
-Intracellular(예:재조합 DNA, 효소 등)

<중 략>

Sonication 은 cell을 분해하는 방법으로는 거의 사용되지 않는다. 이 방법은 고진동수의 음파를 이용하여 세포들을 진동시켜 폭파시킨다. 이 음파는 액체 세포 현탁액에 들어있는 probe를 통해 전달되며, probe의 역학적 에너지는 미세한 수증기 방울등을 형성하기 시작하고, 그러한 방울들에 의해 순간적이지만 집중되어 있는 에너지에 의해 시료에 굉장한 충격파를 전달할 수 있게 된다. 열이 지나치게 발산되는 것을 막기 위해서 sonication은 ice bath 안에서 이루어지게 된다. Sonication method의 경우 시료의 전체 부피가 100ml 이하인 경우 가장 적합하다.

4. 실험 재료
(1) 세포 파쇄법
-균주 : E.coli균
-원심분리기, sonication
-피펫, eppen tube, PB(Phosphaate buffer), 휴지 등

(2) 효소 반응
-효소액 : 균파쇄액
-96well plate
-기질 : 5mM p-nitrophenyl-α-D-glucoside 50ul

5. 실험 방법
(1) 세포 파쇄법
① Cell harvest
◎ 균배양액 1ml을 eppen tube에 담아 원심분리(12000rpm, 2분)
◎ 배지를 버려 cell을 수득한다.

② Washing
◎ 20mM PB(Phosphate buffer) 1ml 넣고 풀어준 후 & 원심분리. 상등액 버림

참고 자료

없음