Spin column kit를 이용한 plasmid DNA의 분리 및 제한효소 처리

소개

Spin column kit를 이용한 plasmid DNA의 분리 및 제한효소 처리 실험보고서입니다.
실험재료, 실험방법 및 결과이미지, 고찰 1page분량이 포함되어 있습니다.

목차

1. 실험제목
2. 실험목적
3. 실험재료
4. 실험방법
5. 실험결과 및 해석
6. Chromosomal DNA와 plasmid DNA를 선택적으로 분리하기 위한 과정과 차이점을 설명하시오.
7. plasmid 분리 kit의 각 solution(buffer용액)의 용도를 설명하시오.
8. DNA분리 과정에서 잔존용액을 완벽하게 제거하지 않을 경우, 발생하는 문제점은 무엇인가?
9. 제한효소란 무엇인지 설명하시오.
10. 실험에 사용한 각종 제한효소를 source(유래 균주) 및 인식 염기서열을 조사하여 제시하시오.

본문내용

1. 실험제목
Spin column kit를 이용한 Plasmid DNA의 분리 및 제한효소 처리

2. 실험목적
Spin Column kit를 이용하여 E.coli의 재조합 plasmid DNA를 분리하고 제한효소를 처리한 후 전기영동을 통해 DNA band를 확인한다.

3. 실험재료
-Plasmid mini-prep용 spin column kit(Bioneer Co. Korea)
-Recombinang Escherichia coli MC1061
-LB broth(0.5% Tryptone, 0.5% Yeast extract, 1% NaCl+100μg/ml ampicillin)
-각종 제한효소류(RE: Restriction endonucleases)*이번실험에서는 PstⅠ사용.

4. 실험방법
(1) 재조합 대장균 배양액 1ml를 취하여 microcentrifuge tube에 담고 7000rpm에서 1분간 원심분리하여 균체를 회수한다.
(2) Buffer1을 250μl 넣은 후, pellet을 풀어준다. (vortexing 가능)
(3) Buffer2를 250μl 넣은 후, inversion 하여 잘 섞어준다. (vortexing 불가능)
(4) Buffer3을 350μl 넣은 후, inversion 하여 잘 섞어준다. (vortexing 불가능)
(5) 12000rpm(4℃) 10분간 원심분리한 후, 상등액을 취하여 spin column에 loading한다.
(6) Spin Column을 12000rpm, 1분간 원심분리하고 column을 통과한 용액을 제거한다.
(7) Buffer D 500μl 넣은 후, 5분 방치한 다음 12000rpm, 1분간 원심분리하고 column 통과액을 버린다.
(8) Buffer4 700μl 넣은 후 12000rpm, 1분간 원심분리하고 column 통과액을 버린다.
(9) Spin Column을 12000rpm, 1분간 추가로 원심분리하여 잔존 용액을 제거한 후 column을 준비된 새로운 microcentrifuge tube로 옮긴다.

참고자료

· 없음