전기영동을 이용한 단백질의 분리 동정 및 정량

소개

임상화학에서 자주 쓰이는 단백질정량법에 대해 기술하였습니다.
단백질정량은 주로 전기영동을 이용하여 이루어집니다. 그래서 전기영동에 대한 내용을 더하여 단백질정량방법을 간단히 기술하였습니다. 글을 읽는 것 만으로는 이해하기가 힘들기 때문에 그림을 많이 첨부하였습니다.
당신의 자료 수집에 도움이 되었으면 좋겠습니다.

목차

1. 전기영동 용 buffer 제조(pH 8.6)
2. 전기영동의 지지체(gel)
3. 검체중의 단백질 정량 (by standard curve)

본문내용

1. 전기영동 용 buffer 제조(pH 8.6)

1) Chemical balance 사용법
쉽게 말해서 중량을 재는 측정기로서, 정밀측정을 필요로 하지 않는 목적에 사용하는 상명천칭과 시료, 표준시약 및 반응생성물의 중량측정 등 정밀한 칭량에 사용되는 화학천칭이 있다. Chemical balance는 화학천칭이라 한다. 천칭 중 가장 대표적인 것으로 분석용 천칭이라고도 한다. 보통은 칭량 100∼200g, 감량 1mg, 실감량 0.1mg의 것이 사용되고, 실감량 0.01mg인 것은 정밀천칭 또는 마이크로천칭이라고 한다.

① 영점(zero point)의 측정
화학천칭상자의 영점조절 나사를 돌려 수증기의 기포의치를 올바르게 하여 천칭을 수평이 되도록 유지한다. 다음에는 천칭접시 위에 아무 것도 올려놓지 않고 상자문을 닫은 그대로 행들을 조심스럽게 돌려 지침을 진동시켜 1~2회 왕복시킨 후 좌우의 진동을 눈금으로 보고 읽는다. 진동의 눈금을 읽는 법은 눈금판의 중앙이 0, 그의 왼편을 -, 오른편을 +로 하고 처음 진동한 쪽을 3회, 다른 쪽을 2회 서로 지침이 닿는 곳의 눈금의 1/10까지를 읽는다. 눈금의 확인 다음에는 핸들을 원래의 상태로 하여 지침을 원위치에 가도록 한다. 좌우의 정지점을 각각 평균하도 또 이 두 개의 평균값을 합하여 2로 나눈 것이 영점이다. 이 영점은 눈금판의 0위치와 일치할 필요는 없다. 그러나 만약 영점이 눈금판의 중앙 0에 대해서 좌우 어느 한편으로 크게 기울어 있을 때에는 천칭을 고정해 두고 천칭대 끝에 있는 나사를 돌려 조절한다.

<중 략>

UV-Visible spectrophotometer의 기본 원리는 분자들의 HOMO와 LUMO라는 에너지 레벨을 가지고 있는데 이를 spectrophotometer는 바닥 상태와 들뜬 상태의 에너지 차이를 측정해주는 것이다. (HOMO와 LUMO의 차이는 바닥상태에서 들뜬 상태의 차이이다.)
이 spectrophotometer의 광원에서 백색광이 방출된다. 이것을 어떤 프리즘과 거울을 이용하여 각 파장 대의 빛을 샘플에 투과하게 한다. 그러면 이때의 빛이 통과를 하다가 어떤 특별한 파장 대에서 sample이 빛을 흡수 하게 된다. 그럼 기계에서는 샘플에 보내준 빛과 투과되어서 나온 빛을 비교하여 그래프로 나타나게 해 준다. 그럼 그 흡수된 파장대에서 분자의 전자가 바닥상태에서 들뜬 상태로 될 때의 에너지를 알 수 있다.

참고자료

· 없음