[서울대학교 생물학실험] dna추출, 형질전환, 전기영동

소개

서울대학교 생물학실험1 dna추출 형질전환 전기영동 레포트입니다.
학점은 A+받았습니다.

목차

1. 실험제목
2. Abstract & Introduction
3 Experimental materials and procedures
4. Results
5. Discussion
6. Reference

본문내용

1. 실험제목

1) 배지만들기 & 형질전환
2) DNA 추출
3) 제한효소와 전기영동

2. Abstract & Introduction

[실험목표]
1. 영양분의 조성을 맞춰준 배지를 만들어 보고 미생물을 배양해 본다.
2. 1번 실험에서 얻어진 결과를 통해 DNA를 추출해본다.
3. 제한효소와 전기영동을 통해 DNA band를 확인해본다.

배지
미생물이나 세포를 키우기 위한 액체 또는 젤 형태를 가지는 인공 영양체. 영양분의 구성은 배양체의 종류나 배양 조직, 기관의 종류에 따라 달라질 수 있다. 실험을 통한 결과를 잘 얻기 위해서는 필요한 미생물을 많이 배양하여 수차례 실험을 반복할 수 있어야 하기 때문에 미생물이 살기 좋고 증식이 가능한 환경이 필요하다. 따라서 어떠한 미생물이 살 것이냐에 따라 배양 배지의 온도, 수소 이온의 농도(pH), 통기, 물, 습도, 재료의 혼합 비율, 빛의 세기 정도 등도 함께 달라진다.

<중 략>

(2) 반응이 진행되는 동안 1% agarose gel(w/v)를 준비한다.
(작은 gel cast 하나를 기준으로 대략 25ml의 1% agarose solution이 필요하므로, 4조를 기준으로 한꺼번에 100ml를 만들면 된다.)
100ml의 1xTAE에 1g agarose를 넣고 전자레인지로 2분간 heating하고 식힌다.
(뜨거우니 조심할 것! 시간이 모자라면 흐르는 물에 살짝 식힌다.)
(3) 위에서 준비된 1% agarose gel (100ml)에 1ul의 EtBr을 넣어주고, 고르게 섞이도록 살짝 흔들어 준다. gel cast에 comb를 꼽은 후, gel을 조심스럽게 붓고 20~30분간 굳 힌다.
(EtBr은 발암물질이므로 피부에 닿지 않도록 glove를 끼고 hood에서 조심히 다루어야 한 다. 사용하고 남은 EtBr은 락스로 inactivation시킨 후 처리해야한다.)
(4) electrophoresis chamber를 준비하고, 1xTAE running buffer를 표시선까지 붓는다.
(5) 30분간 incubation이 끝난 sample에 2ul의 6x loading dye를 넣고, 잘 섞는다.
(6) 굳은 gel을 조심스럽게 1xTAE buffer가 담긴 chamber에 넣고 soaking한다.

참고자료

· George M. Malacinski, Essentials of molecular biology, Jonesandbartlett, 2003
· 김종협 외 2, 『미생물학 실험서』
· Campbell, ‘생명과학’, 8th edition, 바이오사이언스, 2008, pp.448~461
· 네이버 블로그(http://blog.naver.com/h2hiro28?Redirect=Log&logNo=140037000350)