[생화학 실험보고서] SDS-PAGE & Bradford Assay

소개

PAGE의 기본 원리를 이해하고 Bradford method를 이용하여 standard curve를 그린 뒤 protein concentration을 결정하는 실험입니다.

목차

1. 목적
2. 원리
3. 시약 및 기자재
4. 실험방법
5. 실험결과
6. 고찰
6. 참고문헌
7. 추가문제

본문내용

1. 목적
PAGE의 기본 원리를 이해하고 Bradford method를 이용하여 standard curve를 그린 뒤 protein concentration을 결정한다.


2. 원리
1) SDS-PAGE theory
- 전기장 내에서 전하를 띈 물질이 이동하는 성질을 이용
- v = Eq / f (v : 물질의 속도, E : 전기장의 세기(volts/cm), q : 물질의 net charge, f : 마찰상수)
* 마찰상수 f는 물질의 질량과 모양에 따라 다름.
2) SDS-PAGE의 목적
- 이론에 따르면 SDS-PAGE는 물질의 질량과 모양에 따라 물질을 분류하는데, 모양에 대한 정보는 여러 많은 변수에 의해 결정되는데 비해 질량에 관한 정보는 일정 조건이 유지되면 쉽게 얻을 수 있다. 따라서 SDS-PAGE를 이용하여 물질의 질량에 관한 정보를 얻어낼 수 있다.
3) Polyacrylamide gels
- 단백질의 분리정제에 사용되는 gel은 acrylamide와 N,N`-methylene-bis-acrylamide (cross-linking reagent)와의 free radical polymerization을 통해 얻을 수 있다. Polymerization 반응은 ammonium persulfate와 N,N,N`,N`-tetramethylethylenediamine (TEMED)같은 initiator catalyst system을 이용하여 조절할 수 있다.
- Polyacrylamide gel의 장점은 작은 size에서 중간 size의 protein을 구분하는 데 좋은 resolving power를 갖고 있다는 것(30,000 ~ 300,000에서 가장 좋음), 큰 sample에서도 사용될 수 있다는 것, protein과 matrix와의 interaction이 적다는 것, matrix의 physical stability가 크다는 것, 그리고 cross-linker의 농도조절을 통해 pore size를 조절할 수 있다는 것 등이 있다.
4) Starting material, polymerization reaction, cross-linking to form gels

참고자료

· 1) 생화학실험(2) 실험교본, 교육과학기술부의생명특성화사업단.
· 2) 생화학실험(1) 실험교본, 교육과학기술부의생명특성화사업단.
· 3) Jeremy M. Berg, John L. Tymoczko, Lubert Stryer. 2007, Biochemistry, sixth ed.
· 4) http://en.wikipedia.org/wiki/