[생화학 실험보고서] E coli의 DNA 플라스미드 추출 및 농도 측정 실험

소개

원하는 DNA를 Plasmid에 삽입하고 E. coli에 transformation하여 DNA의 양을 증폭시킨 뒤 이를 추출하여 순도와 농도를 측정하는 실험입니다.

목차

1. 목적

2. 원리

3. 시약 및 기자재

4. 실험방법

5. 실험결과

6. 고찰

7. 참고문헌

본문내용

1. 목적
원하는 DNA를 Plasmid에 삽입하고 E. coli에 transformation하여 DNA의 양을 증폭시킨 뒤 이를 추출하여 순도와 농도를 측정한다.


2. 원리
1) Plasmid
Plasmid는 chromosomal DNA와는 별개로 bacteria 세포 내에서 발견되는 작은 DNA로 chromosomal DNA와 비교해 볼 때 크기가 상당히 작고(4~100kb) 스스로 복제가 가능하다. 자연계에서 plasmid는 항생물질, 중금속, mutagen, bacteriophage등에 대한 내성 유전자를 운반하거나 제한 효소, unusual amino acid를 생산하기도 하며, 복잡한 유기화합물을 분해하는 유전자를 가지고 있는 경우도 있다. 일부 plasmid는 접합과정(conjugation)을 통해 다른 bacteria 세포에 감염시킬 수 있고, 이를 이용하여 유전형질을 쉽게 변환시킬 수 있으며, 순수하게 분리정제하기도 쉽기 때문에 plasmid는 현대 분자생물학에서 가장 널리 사용되는 유용한 도구가 되고 있다. 분자생물학에서 cloning vector로 사용되는 plasmid는 replication origin, selectable marker, cloning site의 3가지 공통요소를 가지고 있다.

<중략>

filter-srerilized ampicilin을 final 50 ~ 100 ㎍/㎖의 농도로 첨가한다.)
Plasmid bearing E. coli strain
Solution Ⅰ. (50 mM glucose, 25 mM Tris/Cl (pH 8.0), 10 mM EDTA)
Solution Ⅱ. (0.2 M NaOH, 1 % (w/v) SDS)
-> 10 N NaOH와 10 % (w/v) SDS stock으로부터 사용 직전 제조한다.
Solution Ⅲ. (3M potassium acetate (pH 5.5), 11.5 % (v/v) glacial acetic acid)
Isopropanol, 70 % ethanol, pH 8.0 TE (10mM Tris-Cl pH 8.0, 1 M EDTA), RNase A (10 ㎎/㎖)

참고자료

· 생화학실험(2) 실험교본, 교육과학기술부의생명특성화사업단.
· Jeremy M. Berg, John L. Tymoczko, Lubert Stryer. 2007, Biochemistry, sixth ed.