실험보고서5- western blot`

소개글

discussion꼼꼼히 작성했습니다!

목차

1. Date

2. Title

3. Purpose

4. Principles

5. Materials

6. Methods

7. Results

본문내용

- 원리 : Antigen-Antibody reaction을 이용하여 여러 단백질의 혼합물로부터 어떤 특정 단백질을 찾아내는 방법이다. 이러한 Western blot방법은 전기영동으로 분리한 단백질의 검출을 쉽게 하고 항원 단백질의 검출 및 sterodid-hormone receptor의 검출 등 각종 분석에 이용되고 있다. 첫 번째 단계로 분석하고자 하는 단백질을 SDS-PAGE에 걸어 크기별로 분리한다. SDS-PAGE단계에서는 단백질이 고유한 3차 구조를 잃고 linear상태가 되어 순전히 분자량에 따라 분리가 된다. 분자량에 따른 분리는 전기영동시 glycine과 Tris-HCl에 의한 수소 이온농도 구배를 가져서 단백질이 가진 음전하량에 따른 이동에 의한 것이다. 두번째 단계로 nitrocelluose, PVDF 및 nylone membrane같은 filter에 transfer하는 방법이다. 이렇게 transfer하는 과정 동안 단백질로부터 SDS가 제거되고 단백질의 구조가 재생되면서 본래의 항원 결정기를 갖게 된다. Transfer되는 과정 동안 이동 효율은 분자량에 달려 있는데 분자량이 작은 단백질은 큰 단백질에 비해 효율성이 떨어진다. 이러한 문제는 메탄올을 처리함으로써 소수성 결합을 강화시켜 membrane에 잘 결합하도록 한다. 3번째 단계로 그 후 원하는 단백질을 Fluorescence(FITC: Fluorescein isothiocyanate), Radioactivity, Enzyme (peroxidase, alkaline phosphatase, beta-galactosidsase, glucose oxidase)등을 이용하여 확인 할 수 있다.

참고 자료

http://blog.naver.com/cheshiercats?Redirect=Log&logNo=80050603993
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David L. Nelson, 2010, 레닌저 생화학, 제 5판, 월드사이언스, p.174
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