단백질 분리정제

소개

단백질 분리정제

목차

5장. 단백질의 정제 및 특성 규명 기술

5.1 세포내에서 순수한 단백질 추출하기

선결조건

*회수율
1. 실험 방법
2. 균질화
3. 분별 원심분리법(differential centrifugation)
4. early steps
5. second steps 크로마토그래피 방법
6. last steps 전기영동

5.4 단백질의 1차 구조 결정하기
1. 아미노산성분 분석
2. 아미노산 서열분석(1차구조)

본문내용

2. 아미노산 서열분석(1차구조)
1) 모든 이황화 결합의 절단
performic acid를 이용한 산화 환원 반응으로 S-S결합을 잘라 준다.
2) N-말단과 C-말단 아미노산의 결정
a) N-말단의 결정
- sensitive and powerful
     - but cannot be repeated (hydrolysis step totally degraded the peptide)
① Sanger의 FDNB method
• FNDB는 amino terminal residue와 결합하여 yellow 2, 4-DNP derivative로 표지
• 이를 acid로 가수분해 시키면 전부 가수분해 되나, DNP와 말단 α-amino기 사이의 covalent bond는 분해되지 않고, 2, 4-DNP derivative 로 존재 , 이는 각종 amino acid의 authentic DNP derivative(표준 DNP 유도체)를 이용한 chromatographic comparison에 의해 동정할 수 있다.
② Densyl Chloride method
• Free α-amino group과 결합하여 densyl derivative 만든다.
이는 highly fluorescent 하므로 DNP 유도체보다 더 낮은 농도에서도 detected and measured.
b) C-말단의 결정
Carboxypeptidase의 이용
• Polypeptide를 이 효소로 처리하면 polypeptide의 carboxyl-terminal 등의 peptide bond만 가수분해 된다. 최초의 유리된 amino acid를 정량하면 carboxyl-terminal residue를 동정할 수 있다.
3) 폴리펩티드의 펩티드 단편으로의 절단
a) trypsis

참고자료

· 없음