[기초유전학실험]2.Plant genomic DNA extraction

소개글

실험서입니다.

목차

1. Abstract

2. Introduction

3. Material & Method

(1) materials

(2) methods

4. Result

5. Discussion

6. Reference

본문내용

(1) materials

• 재료 : 당근 잎
• 기구
: hotblock, 막자사발 및 막자, microcentrifuge, tips, pipette, e-tube, conical tube
• 시약
: 70% EtOH, 100% isopropanol, Tris base, liquid nitrogen(액체질소), RNase A, EtBr
• 용액
: DNA 추출 용액 (50mM Tris-HCl(pH 8.0), 100mM NaCl, 5mM EDTA(pH 8.0),
0.3% β-mercaptoethanol), 5M 칼륨아세트산 용액, 20% SDS 용액

(2) methods

① 연한 식물조직 0.2g을 막자사발에 넣은 후 액체질소를 붓는다. 액체질소가 거의 증발하기 시작하면 조직을 고운 가루가 될 때 까지 막자로 간다. 이때 필히 장갑을 끼고 액체질소가 옷이나 신체에 닿지 않도록 주의 한다.
② 시약 스푼을 액체질소에 살짝 담가 냉각시킨 후 조직 가루를 원심분리용 시험관에 넣은 다음 2ml의 DNA 추출용액을 붓고 시약스푼으로 재빨리 섞어준 후, 튜브의 뚜껑을 닫고 조직가루가 용액과 충분히 섞이도록 앞뒤로 흔들어 준다.
※ ①,②번 과정은 1,3조는 제외한다.
③ 각 조당 조직가루가 녹아있는 DNA 추출용액을 e-tube에 800μl씩 넣는다. 만약 RNA를 제거할 필요가 있을 때에는 15μl의 RNase A(100mg/ml)를 넣어준 다음 잘 흔들어 섞어 준 후 37℃에서 30분간 반응 시킨다.

참고 자료

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최진유전학. SNUSTAD·SIMMONS 저. 김상구 외 역. 범한서적주식회사 2000