대장균의 Plasmid DNA분리

소개

plasmid DNA를 분리하는 방법에는 여러 가지가 있지만, 여기서는 가장 보편적으로 사용되는 방법인 alkaline lysis 방법을 사용한다. 기본적인 원리는 세균의 세포벽과 세포막을 부수고 DNA만을 분리하는 것이며, 이 때 중요한 점은 세균이 갖고 있는 염색체 DNA는 상대적으로 plasmid에 비해 매우 크기 때문에 이런 성질을 이용하면 분리할 수 있다.
제한효소를 이용한 DNA 절단, 접합, 형질전환, 염기서열 결정과 같은 용도를 위한 plasmid DNA는 적은 양의 배양액으로 부터 정제하는 저순도의 DNA만으로 충분하다.

목차

1. Introduction
○ Plasmid의 정의
○ plasmid의 특징
○ 플라스미드의 이용
○ Plasmid DNA의 분리

2. Materials and Methods
○ Luvia - Bortami(LB) Medium 제조(1L 기준)
○ solutionⅠ, Ⅱ, Ⅲ 제조
○ alkaline Method에서 쓰이는 solution의 역할
○ sample 접종 및 alkaline Method

3. Results

4. Discussion

본문내용

EXPERIMENT
REPORT
-Plasmid DNA 분리-
1. Introduction
plasmid DNA를 분리하는 방법에는 여러 가지가 있지만, 여기서는 가장 보편적으로 사용되는 방법인 alkaline lysis 방법을 사용한다. 기본적인 원리는 세균의 세포벽과 세포막을 부수고 DNA만을 분리하는 것이며, 이 때 중요한 점은 세균이 갖고 있는 염색체 DNA는 상대적으로 plasmid에 비해 매우 크기 때문에 이런 성질을 이용하면 분리할 수 있다.
제한효소를 이용한 DNA 절단, 접합, 형질전환, 염기서열 결정과 같은 용도를 위한 plasmid DNA는 적은 양의 배양액으로 부터 정제하는 저순도의 DNA만으로 충분하다.
○ Plasmid의 정의
플라스미드는 박테리아의 세포안에 존재하는 박테리아 크로모좀 이외의 작은 원형의 DNA분자 이다. 형태는 원형이고, 이중 나선으로 되어 있으며, 박테리아의 유전자와는 독립적으로 분열할 수 있는 능력을 가지고 있다. 그러한 이유로 유전자 클로닝을 위한 벡터로 많이 사용되는 것 중 하나다.
벡터란 유전자 클로닝시에 우리가 원하는 유전자를 숙주 세포안으로 이동시켜 그 안에서 다량으로 복제 가능하도록하는 일종의 운반체를 말하며, 플라스미드는 그를 위한 조건을 가지고 있다. 우선 자가 복제를 위한 복제 기점 (origin of replication)을 가지고 있으며, 유전자의 발현, 즉 삽입된 유전자의 전사를 유도하는 promoter, 나중에 세포 배양에 의한 대량 생산후에 플라스미드가 들어간 세포와 그렇지 않은 세포를 구별해 내기위한 selective marker, 그리고 숙주안에서의 copy number 를 조절하는 replicon, 그리고 원하는 유전자를 끼워 넣을 수 있는 insertion site 등을 가지고 있다. insertion site는 제한 효소에 의해 잘려질 수 있는 부위인데 거기로 우리가 복제를 원하는 유전자를 삽입할 수 있는 것이다.
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참고자료

· 없음