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소개
DNA purification from E.coi
실험목적, 개요, 방법, 결과및 고찰 실험일지입니다..
자세히 정리 열심히 했었습니다
비슷한 실험하시는 분들께 도움이 되었으면 좋겠네요^^목차
없음본문내용
목적 : miniprep 실험방법을 통해 transformation plasmind DNA를 분리한다.
개요 :
DNA purification실험은 말 그대로 DNA를 추출하는 실험이다. mini prep 실험 방법은 boiling, lysozyome, Alkali lysis method 등 여러 방법들이 있는데, 기본과정은 세포벽.세포막을 제거하는 과정과 제거된 오염물을 DNA로부터 분리해주는 두 과정이 있다.
화학적 방법이 DNA 회수율이 상대적으로 높고, 장기간 보관이 용이하여 보편적으로 사용된다. 그러나 PCR실험에서는 순도는 낮지만 과정이 간단하여 다른 DNA에 의한 오염을 줄일 수 있는 물리적 방법도 종종 사용한다.
그 과정은 miniprep이라고 사실 miniprep, midiprep, maxiprep, megaprep, gigaprep이 존재하지만 원래 명칭은 plasmid preparation이다. 결국 준비하는 과정인데 DNA만 따로 뽑아내는 것이다. 그 양의 차이만 있을뿐 과정은 같다. 이런 과정은 상당히 어렵게 보일지 모르지만 간단하다. E.coli는 우리가 알고 있는대로 gram-negative이다. 곧 cell wall이 없기때문에 cell resuspension buffer로 부풀리고, cell lysis buffer로 녹여낸다음 neutralization buffer로 DNA의 안정화를 시켜낸다.참고자료
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