Protein extraction and Quantitative analysis

소개글

Protein extraction and Quantitative analysis

목차

Ⅰ. Abstract
Ⅱ. Introduction
Ⅲ. Materials
Ⅳ. Chemical reagent & Apparatus
V. Methods
Ⅵ. Results
Ⅶ. Discussion
Ⅷ. Reference

본문내용

Ⅰ. Abstract
이번 실험은 나머지 두 실험과 연관되어 있다. 우리는 배양 온도와 시간을 달리한 당근에서 각각 Leaf와 stem을 떼어내어 곱게 갈아서 단백질을 추출하는 실험을 하였다. buffer에 있는 여러 가지 시약들의 역할로 세포의 막을 깨어주고 단백질을 변성시키며 이황화결합을 끊어주어서 많이 추출해 낼 수 있도록 하고 pH를 맞춰주며 안정시킨다. 단백질만 침전시키어서 pellet을 얻어내고 추출한 단백질을 정량화하기 위해 Bradford assay를 이용한다. Bradford assay는 Coomassie염료가 단백질과 결합하는 것을 이용해서 이 염료가 흡수하는 빛의 양을 측정하므로써 단백질의 농도를 추정하는 방법이다. 이미 알고 있는 단백질이 농도를 비교하기 위해 소혈청물질인 BSA를 먼저 알고 있는 시료대로 흡광도를 측정하여 Standard curve를 그리고 추세식을 이용하여서 농도를 계산하기로 하였다. 실험결과 다른 배양조건이었지만 모든 조건에서 Leaf보다는 Stem에서 조금 더 많은 단백질의 농도가 계산되었다. 배양조건으로 비교해보면 37℃에서는 별 차이 없던 두 기관에서의 양이 40℃로 온도가 상승하자 단백질 양의 많은 차이를 보였다. Leaf과 Stem은 거의 두 배 이상의 양의 차이를 보였다. 이것은 Leaf의 조직이 더 연하고 열에 의해 변성받기 쉬우므로 단백질이 파괴되어 단백질의 양이 줄어든 것으로 볼 수 있고 열충격 단백질과 연관 짓게 되면 Leaf보다는 Stem이 열충격 단백질이 더 잘 발현되고 기능을 하여 단백질의 양을 유지할 수 있게 만들었다고 추측이 가능하다. 식물이 열에 노출되었을 때 Leaf보다는 Stem이 더 강하게 내성을 가지고 있다고 생각할 수도 있다.



Ⅱ. Introduction
1) 단백질
모든 생물에서 단백질은 20가지의 아미노산(amino acid)들이 연결되어 만들어진다. 그러나 이러한 아미노산들은 서로 다른 순서로 배열됨으로써 서로 다른 화학적 성질을 지닌 단백질을 만들어 내는데, 이는 문자의 배열 순서가 바뀜으로써 서로 다르게 발음되는 단어를 만들어 내는 것과 같다.

참고 자료

1) 필수세포생물학 / 박상대 / 교보문고 / 2005. 2. 1
2) http://blog.daum.net/docuus/7791098
3) http://mybox.happycampus.com/nike0/371470
4) http://ko.wikipedia.org
5) 분자생물학 / 박상대 / 라이프사이언스 / 2003. 2. 21