Affinity chromatography를 이용한 단백질의 분리

소개글

Affinity chromatography를 이용한 단백질의 분리

목차

1. 실험제목
2. 실험목적
3. 실험이론
(1) Affinity chromatography란 ?
(2) Ligand와 결합한 단백질의 용출방법
(3)Immobilized Metal chelate Affinity Chromatography (IMAC)
4. 참고문헌

본문내용

1. 실험제목 : Affinity chromatography를 이용한 단백질의 분리
2. 실험목적 : Affinity chromatography의 원리를 이해하고, 주어진 혼합 단백질을 분리하여 본다.
3. 실험이론
(1) Affinity chromatography란 ?
친화성 크로마토그래피라고 하며 용질분자와 지지체 위에 결합되어 있는 리간드(ligand) 사이의 특이한 화학적 상호작용에 기초한다. 리간드와 용질사이의 친화성 결합은 분자의 크기와 모양에 특이할 수 있다. 친화성 크로마토그래피에서는 용질 중 한 성분이 정지상의 리간드와 특이한 상호작용으로 결합함으로써 다른 용질들과 분리된다.
따라서 컬럼 내 정지상에 단지 한 용질과만 고유하게 상호작용하는 리간드를 공유결합으로 붙인다. 시료를 이 컬럼에 통과시키면 단지 한 용질만 정지상에 붙게 된다. 그 다음 다른 성분들을 잘 씻어 버린 후, 달라붙은 성분은 용질과 정지상 간의 결합을 약화시킬 수 있는 조건으로 바꿔 줌으로써 용리된다.
예를 들면, 공유결합된 리간드가 특정한 단백질에 대해 항체인 경우이다. 여러 종류의 단백질을 포함한 혼합물이 컬럼을 통과할 때, 단지 항체와 반응하는 하나의 단백질만 컬럼에 결합된다. 다른 모든 단백질이 컬럼을 통해 씻겨 나간 후, pH를 변화시키거나 이온세기를 변화시킴으로써 결합되어 있는 특정한 단백질을 항체로부터 떨어지게 하여 회수한다.


이러한 방법은 효소, 항원, 특이적 핵산, 비타민 결합 단백질, 약, 호르몬 수용체 같은 물질을 순수 분리할 때 자주 이용된다.
친화성 크로마토그래피의 장점을 특정분자만 골라서 분리가 가능한 것이라고 한다면 단점은 너무 비슷한 분자를 구분하기 쉽지 않고 같은 분자라도 이온성이 있어 산성일 때의 형태와 중성일 때의 형태만 따로 분리하기가 힘들다는 것이다. 그래서HPLC법과도 연계하여 분리하기도 한다.

참고 자료

분자생물학적 분리기술, 정봉현
http://www.foodnara.go.kr/portal/beans/kfdadictionary/jsp/food_word_dic_detail.jsp?field_sq=7119
http://cafe.naver.com/solgent.cafe?iframe_url=/ArticleRead.nhn%3Farticleid=36
http://blog.naver.com/tsngwow?Redirect=Log&logNo=50024736168
http://kin.naver.com/detail/detail.php?d1id=11&dir_id=110205&docid=8390073&qb=QWZmaW5pdHkgY2hyb21hdG9ncmFwaHk=&enc=utf8&pid=fWZplB331ylsstFC7%2B0ssv--137666&sid=StEo14US0UoAAG3uE1g