DNA ligase, 전기영동법, 제한효소가 자르는 염기서열

소개

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목차

1. DNA ligase
2. 제한효소(restriction enzyme)와 Pst I , Xba I 이 자르는 염기서열
1) 제한효소(restriction enzyme)
2) Pst I , Xba I 이 자르는 염기서열
3. DNA 전기영동법
(1)이동계면 전기영동법 (Moving boundary electrophoresis)
(2) 띠 전기영동법 (Zone electrophoresis)
(3) 불연속성 전기영동(disc electrophoresis) 

본문내용

1. DNA ligase
DNA 복제 및 수복 때 2중 나선 중 한쪽 사슬의 절단부인 3`-하이드록시기와 5`-인산기를 포스포디에스테르 결합시키는 효소로 주로 유전자 재조합 과정에 사용된다.
효소반응에서는 Mg2+＋를 요구하며, 파지의 리가아제는 ATP를, 박테리아의 리가아제는 DPN(디포스포피리딘뉴클레오티드)을 필요로 한다. ATP와 DPN은 아데닌산과 효소복합체 형성에 이용된다. 복합체의 합성이 제1단계 반응이며, 제2단계에서는 이 복합체와 DNA가 반응하여 DNA에 포스포디에스테르 결합을 형성해 AMP를 방출한다. 효소＋DPN(ATP)­78효소·AMP＋NMN(PPi) 효소·AMP＋DNA­78DNA(연결)＋효소＋AMP 이 효소는 동물세포에서도 발견되며, 생체 내에서는 DNA복제, DNA수복에 관여하고 있다.
현재 많이 사용되는 ligase는 T4 DNA ligase와 E.coli DNA ligase이다. T4 DNA ligase는 cofactor...



* 전기영동법의 종류
전기영동은 매우 광범위한 분석과 분취(preparative)기법의 기초를 제공한다. 이들 중 대부분은 전기영동적 이동도의 차이특성과 다른 분리적 메커니즘들을 결합하여 혼합 기법으로 이용되고 있다.

(1)이동계면 전기영동법 (Moving boundary electrophoresis)
분리하고자 하는 분자들이 용액 내에 산재해 있는 상태에서 전류를 통하여 용매와 용액사이 또는 용액과 용액사이에 계면을 이루게 하는 전기영동법이다. 전위 경사를 제공하기 위해 관의 양끝에 위치하는 두 개의 전극과 완충액으로 채워진 U자 관을 사용한다. 시료를 U자 관의 바닥에 넣고 따듯한 공기에 의한 영향을 줄이기 위하여 낮은 온도(4℃)에서 전기영동을 실시한다. 분리된 구성 성분들은 완충 용액의 간섭 효과와 같은 광학적 성질들, 예를 들면 간섭 효과와 같은 미세한 ...

참고자료

· 없음