Isolation of High-Molecular DNA from Eukaryotic Samples

소개

T-DNA tagging 방법은 genome size가 작은 Arabidopsis thaliana와 같은 식물에 적합한 방법인데, transformation 후 재생시켜 얻은 식물에서 정상 식물과 다른 genotype을 보이는 mutant를 선발하여 분석하는 방법이다.
이번 실험에서는 genotype을 분석하는데 필요한 비교적 간단한 genomic DNA 분리방법 및 원리를 이해하고 이를 바탕으로 DNA를 분리하였다. genomic DNA 분리 과정은 세포벽 및 세포막 제거, 세포 내 구성요소와 DNA의 분리, DNA 분해 방지로 이루어졌다. 잘게 갈린 A. thaliana tissue에 CTAB와 β-mercaptoethanol의 처리, /Isoamylalcohol extraction, isopropanol precipitation 및 EtOH precipitation and wash를 함으로써 genomic DNA를 얻을 수 있었다. 이렇게 정제한 genomic DNA의 concentration과 purity를 확인하여 비교적 pure하게 정제되었음을 확인하였고, 그 다음으로 genotype 분석 방법 중 하나인 PCR, electrophoresis을 이용하여 genotyping할 수 있었다. PCR로 증폭한 DNA를 gel loading하여 UV transilluminator로 관찰하여 분석해 본 결과 heterozygous mutant와 homozygous mutant를 확인할 수 있었다.


3주동안 수행한 실험 레포트입니다.

목차

Abstract:
Introduction:
Materials & Methods:
Result:
Discussion:
Reference:

본문내용

Abstract:
T-DNA tagging 방법은 genome size가 작은 Arabidopsis thaliana와 같은 식물에 적합한 방법인데, transformation 후 재생시켜 얻은 식물에서 정상 식물과 다른 genotype을 보이는 mutant를 선발하여 분석하는 방법이다.
이번 실험에서는 genotype을 분석하는데 필요한 비교적 간단한 genomic DNA 분리방법 및 원리를 이해하고 이를 바탕으로 DNA를 분리하였다. genomic DNA 분리 과정은 세포벽 및 세포막 제거, 세포 내 구성요소와 DNA의 분리, DNA 분해 방지로 이루어졌다. 잘게 갈린 A. thaliana tissue에 CTAB와 β-mercaptoethanol의 처리, /Isoamylalcohol extraction, isopropanol precipitation 및 EtOH precipitation and wash를 함으로써 genomic DNA를 얻을 수 있었다. 이렇게 정제한 genomic DNA의 concentration과 purity를 확인하여 비교적 pure하게 정제되었음을 확인하였고, 그 다음으로 genotype 분석 방법 중 하나인 PCR, electrophoresis을 이용하여 genotyping할 수 있었다. PCR로 증폭한 DNA를 gel loading하여 UV transilluminator로 관찰하여 분석해 본 결과 heterozygous mutant와 homozygous mutant를 확인할 수 있었다.
Introduction:
보통 세포 안에 들어있는 DNA 전체를 가리켜 Genomic DNA라고 하는데 세포가 본래 가지고 있는, 그 세포가 살아가는데 필요한 모든 유전 정보를 담고 있는 DNA를 말한다.
DNA isolation은 DNA를 모아 다음 단계의 실험으로 나아가기 위한 단계이다. 먼저

참고자료

· - 권덕기, 식물생리학, 2001, 을유문화사, pp.41~44
· - 유욱준, 최신 분자생물학, 1995, 삼광출판사, pp.402∼408
· - Watson 외, Molecular biology of the gene(5th edition), 2004, Pearson, pp.648~662
· - David L. Nelson and Michael M. Cox, Lehninger Principles of biochemistry(4th edition), 2005, Freeman, pp.283~284
· - http://biochemistry.yonsei.ac.kr/biochem_workshop/PCR.php
· - http://www.postech.ac.kr/class/ls304-2/ex_part3.html
· - http://en.wikipedia.org/wiki/File:Ti_Plasmid.jpg