DNA Ligation

소개

DNA Ligation

목차

1. Abstract
2. Introduction
3. Material & Method
4. Result
5. Discussion
6. Reference

본문내용

이번 실험은 1학기 때 잘라준 Vector인 pET11a와 Insert gene인 DcHSP17.7을 붙여주는 실험이다. Vector를 잘라주고 그 틈 사이에 ligase를 이용해 Insert를 연결시켜 줌으로써 다른 세포 안에 넣어줄 상태를 만드는 것이다.
실험은 Insert와 Vector를 전기영동을 통해 농도를 알아내고 Ligation 할 때 넣어줄 양을 M비율을 따라서 계산해 준다. 그리고 실험에 필요한 Ligase와 buffer, D.W.의 양을 계산에 의해 양을 정해서 Ligation sample을 만들어 준다. 그리고 보관 후에 Ligation이 되었는지를 확인한다.
전기영동 사진을 통해 Vector와 Insert의 농도를 구하고 이것을 계산식을 통해 Ligation 할 때 넣어줄 양을 계산한다. 그리고 넣어줄 Vector의 양을 Insert의 양 식에 대입해서 M비율이 3:1일 경우, 9:1일 경우 넣어줄 Insert의 양을 계산했다.
이번 실험을 통해 Ligation이 잘되는 Insert와 Vector의 M비율, 넣어줄 Ligase의 적절한 Unit을 알 수 있다.

2. Introduction
▶ DNA Ligation [②]
- Ligation은 문자 그대로 DNA나 RNA의 끝을 이어주는 과정을 가리키는 용어이다. 이 반응에 이용되는 효소를 ligase라 하며 DNA를 기질로 사용하는 ligase를 DNA ligase, RNA를 기질로 사용하는 ligase를 RNA ligase라 한다. RNA ligase는 single strand의 DNA 또는 RNA 끼리 연결해 주는 효소로 5`-RACE와 같은 특수한 목적의 실험에서 사 용될 수 있다.
유전자 재조합 과정에 사용되는 ligase는 주로 DNA ligase이며 이 효소는 원핵세포, 진핵세포, 바이러스 등에서 유래한 것이 있는데, 현재 많이 사용되는 ligase는 T4 DNA ligase와 E. coli DNA ligase이다. T4 DNA ligase는 cofactor로 ATP를 필요로 하고,
E.coli ligase는 NAD+를 필요로 한다. 이들 두 ligase는 blunt-ended DNA, cohesive-ended DNA, nicked DNA등에 모두 작용할 수 있으나 E. coli DNA ligase 는 T4 DNA ligase와 비교할 때 blunt-ended DNA에 작용하는 힘이 약하므로 일반적인 유 전자 재조합 과정에서는 T4 DNA ligase를 더 많이 사용하는 경향이 있다.

참고자료

· ① 분자생물학 제2판 / 박상대 / 라이프사이언스 / 2003. 2. 21
· ② http://blog.naver.com/shanti78?Redirect=Log&logNo=40017325793
· ③ http://bric.postech.ac.kr/myboard/read.php?Board=exp_qna&id=87142
· ④http://bric.postech.ac.kr/myboard/read.php?id=102096&Page=1&Board=exp_qna&modetype=search&FindIt=EXT&FindIt1=SUBJECT,%20KEYWORD,%20CONTENT,%20USERNAME&FindText=ligation
· ⑤http://bric.postech.ac.kr/myboard/read.php?id=96078&Page=1&Board=exp_qna&modetype=search&FindIt=EXT&FindIt1=SUBJECT,%20KEYWORD,%20CONTENT,%20USERNAME&FindText=1:3&divpage=3
· ⑥ http://shop.intronbio.com/index.php?var=Good&Good_no=460
· ⑦ http://www.pnas.org/content/95/15/8550/F5.expansion.html
· ⑧http://www.takara.co.kr/shopping/shopping_content_00.asp?strGoodCode=D000004889
· ⑨ http://www.vivo.colostate.edu/hbooks/genetics/biotech/enzymes/ligation.html