연세대학교 생화학실험(2) - RNA isolation from monolayer cell by using Trizol reagent

소개

cell에서 RNA를 추출해보고, 그 실험 과정을 정확하게 이해한다.

목차

◆ 실험일자
◆ 제출자
◆ 목적
◆ 원리
◆ 시약 및 기자재
◆ 방법
◆ 고찰

본문내용

◆ 원리
*RNA 연구
대부분의 protein 양의 조절은 gene expression단계에서 일어난다. 물론, translation 속도를 조절하거나 mRNA와 protein의 수명을 조절하는 방법도 있지만 이는 주로 신호에 빨리 반응하여 양을 조절할 필요가 있을 때에만 쓰이므로 mRNA의 양은 곧 protein의 양이라고 생각해도 무방하다. 따라서 mRNA의 양을 알아내면 그 mRNA에 해당하는 protein의 양도 짐작할 수 있다. 이번 실험에서 한 것은 mRNA의 양을 알아내기 위해 먼저 cell내에서 RNA를 추출해내는 과정이다.

*analysis of RNA - RNA의 양을 알아내서 분석하기 위한 방법들
- Northern hybridization : Size and amount of RNA
- RT-PCR : Amount of RNA , cDNA synthesis
- RNase protection assay : Amount of RNA and mutation detection

*RNA 추출에 필요한 단계
- RNase의 activity를 조절한다 : RNA가 손상되면 안되므로 RNase가 기능하지 못하도록 RNase inhibitor등을 처리하여 inactivation한다.
- Protein 제거 : phenol이나 chloroform을 처리하면 단백질이 denaturation되어 원심분리에 의해 침전된다.
- DNA로부터 RNA분리 : mRNA의 특성인 3` poly A tail을 이용하여 RNA를 DNA로부터 분리하거나, DNA를 제거하여 RNA만 남긴다.

참고자료

· 생화학실험(2) 실험교본, 연세대 생화학과.