식품미생물학및실험 요점정리 <실험> [기말]

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본문내용

ligation
Ligation: Target DNA 즉, 얻어진 DNA의 단편의 양 끝을 vector DNA의 끝부분과 공유결합으로 연결시키는 과정
Ligase: ATP나 유사한 물질에서 인산기를 때어내고 발생하는 에너지를 이용하여 두개의 분자를 결합하는 효소(DNA 수리나 복제할 때 사용)
Insert DNA랑 vector DNA를 연결하기 위하여 Ligase를 이용한 것이다.

Insert와 vector 조건
1. Insert : vector = 3 : 1 (농도비) [insert의 비율이 3보다 높아도 가능하다.]
2. Insert와 vector의 합이 100ng 이상이야 한다.
3. self-ligation test(대조구)를 통해 vector 스스로 얼마나 결합 하는지 확인하기 위함(ligation 성공여부 확인)

Vector의 조건
1.MCS(mutiple cloning site)인 제한 효소 밀집 부위의 존재
2. Selection marker를 통해 내성을 갖는 부위의 존재(LBK 배지에 존재하는 카나마이신에 내성)
3. CIP처리를 통해 인산기를 제거하여 vector끼리 붙는 것을 방지

참고 자료

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